Nährmedien für in vitro

[Gast sebi]

Hallo Fleischi Freunde,

könnte mir mal einer erklären wie das bei der "in vitro"

vermehrung mit den Medien gemacht wird ???.Sind da die

Phytohormone schon mit drinnen oder werden die da noch zugesetzt.und welche Medien werden dafür gebraucht?

Habe über die suche im Forum nichts gefunden :( :(.

Viele Grüsse

Sebi

[Oliver Groß]

Hallo Sebi,

das kommt auf die Zusammensetzung der Nährböden an. Es gibt welche, da sind die Phytohormone schon drin, bei anderen müssen sie noch hinzugegeben werden. Je nachdem für was der Nährboden ist. Vermehrung, Wurzelbildung, Sproßbildung.

Ich habe mal im Internet gelesen, dass jemand den MS-Nährboden als Grundlage nimmt. Diesen verdünnt er dann nochmal, weil er von den Nährstoffen zu reichhaltig ist. Soll gute Erfolge damit haben.

Das Problem ist für den Hobbyzüchter meist die Beschaffnung der Nährböden, Phytohormone und sonstigen Chemikalien die dafür notwending sind. Auch das passende Handwerkszeug müsste man haben. Und steril arbeiten. Sonst hast du statt Fleischfressende Pflanzen nur Schimmel in der Kultur.  :(

Hoffe Dir etwas geholfen zu haben.

Ciao Oliver

[Gast sebi]

Hallo Oliver,

danke für deine Antwort,die hatt mir schon weitergeholfen.

Jetzt nur noch eine Frage,sind denn die Hormone schon im

MS medium oder müsste man die auch noch beimischen?

Habe nähmlich meinen Chemielehrer gefragt ob ich an die

sterielbank dürfrte,weil ich das gerne mit "in vito "mal

ausprobieren würde,und natürlich hatt er zugesagt.

Die nötige aurüstung bekomme ich auch noch irgendwo her.

PS:ich will natürlich den Anbietern keine Konkurentz machen. ;D ;D

Viele grüsse

Sebi

[Oliver Groß]

Hallo Sebi,

also jetzt aus dem Kopf sagen ich, dass keine Hormone im Murashige und Skoog Nährboden enthalten sind. Habe auch mal kurz in der Zusetzung nachgelesen, da stand auch nichts davon.

Ich kann Dir mal einen Link schicken, von der Seite die ich im Posting erwähnt habe.  ;) Ist nur auf englisch. Muss nur mal schauen, wo ich den Link habe. Aber eings vorweg, es hört sich einfacher an, als es ist.

Ich bin auch schon an der Planung, mal IV zu versuchen. Aber habe zur Zeit keinen zeitlichen Puffer dafür. Vielleicht nächtes Jahr. Kannst mir ja mal berichten wie deine Erfolge waren.

Ciao Oliver

[Gast sebi]

Ich werde mich melden wenns bei mir geklappt hat.

Nur müsste ich vorher wissen was man da alles braucht

Vielleicht könntest  mir jemand schreiben was man da an

Chemikalien und Hormonen alles benötigt,ich habe nähmlich null Ahnung von in vitro ??? ???  :'(

PS:kann man denn jeden beliebigen Nährboden nehmen oder

muss das umbedingt das ms medium sein.

Viele grüsse

Sebi

[Oliver Groß]

Hallo Sebi!

Hier erst mal der Link:

http://www.flytrap.demon.co.uk/tc/protocol.htm.

Ich weiß nicht, ob auch anderes Nährboden geht. Habe es halt im Zusammenhand mit dem Link gelesen, das er das mit MS macht. Habe aber von einer Firma, die Invitro gewerblich betreiben folgenden Tip bekommen:

Der Nährboden EVM und EBM im Shop von Hummel Invitro wäre auch für Canivoren geeigent. EVM für die Vermehrung und EBM für die Bewurzelung. Was ich noch nicht rausgefunden haben, weil ich mich noch nicht selbst praktisch damit befasst habe, ob der EBM auch die Sprossenbildung hervorruft oder ob sich diese erst später exvitro entwickeln.  ???

Der Link zum Shop ist: http://www.hummel-invitro.de/invitroshop/enter.html.

Ich maile Dir gleich noch eine PDF-Datei, in der richtig gut beschrieben wird, was man für invitro so noch benötigt. Diese Datei ist so wie es aussieht für den Biounterricht geschrieben worden. Also kann Dir dein Lehrer sicher helfen.

Ciao

Oliver

[Werner Gerber]

Sollte da die Fa. Hummel eigene Forschungen betrieben haben? Vor ca. drei Jahren hatte ich dort schon einmal angefragt, und mir wurde mitgeteilt, dass man keinerlei Erfahrungen mit Karnivoren hätte und deshalb auch keine Empfehlungen geben könne. Es wäre schön, wenn man uns hier auf dem Laufenden halten könnte, was EVM und EBM betrifft.

Gruß Werner

[Oliver Groß]

Hallo Werner,

habe so um den August 2004 mal bei Hummel Invitro angefragt, als ich auf der Suche nach Nährböden war. Bei den "normalen" Quellen (z.b. Sigma) kommt man ja nicht so ohne weiteres dran.  :( Inzwischen habe ich aber evlt. doch einen Weg gefunden.  ;)

Also auf jedenfall hat eine nette Damen mir bei Hummel Invitro gesagt, dass ich für meine Zwecke diese beiden Nährböden nehmen kann. Ich war auch so frech nach der Zusammensetzung zu fragen, dies konnte sie mir verständlicherweise nicht sagen. So wie ich sie verstanden habe, ist der Nährboden flüssig (müsste noch mal in den eMail lesen, was sie genau geschrieben hat). Die Frage ist nur, ob flüssig für unsere Zwecke gut ist. Das würde doch heißen, dass die Gewerbestücke im Nährboden schwimmen würden oder die jeweiligen Pflanzenteile. Wäre doch besser, diesen mit Agar-Agar zu festigen und in Petrischale zu füllen, oder? Nur müsste man dann ja das Agar-Agar auflösen mit dem Nährboden (werden durch die Temparatur nicht die Nährstoffe evtl. zerstört? Immerhin sind es 70°C bei dem Agar-Agar flüssig wird.) Und man müsste dann diesen neuen Nährboden mit Agar ja wieder steril machen, und hier sind es 121 °C bei ca. 1 bis 2 Bar Druck.) Aber einen Versuch wäre es wert. Man bekommst ja mehre Röhrchen Nährboden in einer Packung.

Sobald ich wieder etwas Zeit habe, werde ich mich wieder mehr darum kümmern und selbst mal dort bestellen. Sobald ich eigene Erfahrungen habe, werde ich mal berichten.  ;)

Ciao Oliver

[Gast sebi]

Danke Oliver für den Link,ich werde mich melden wenn

ich damit anfange und ob es bei mir geklappt hat. ;) ;)

[Gast T. Heller]

Hallo zusammen!

Also soweit ich weiß kann man Agar mit Nährmedien durchaus autoklavieren. Bei Pilzen wird eine Lösung aus Agar und Malzextrakt hergestellt und diese anschließend autoklaviert. Da gehen die Nährstoffe auch nicht kaputt.

Auch könnte man statt Agar-Agar-Pulver auch getrocknete Algen nehmen. Diese gibt es auch zu kaufen und sie sind billiger.

Jetzt habe ich aber auch noch eine Frage:

Man könnte doch die Nährmedien auch mit Antibiotika impfen, um Bakterienwuchs zu verhindern!? Was meint ihr???

MfG Thorsten

[Oliver Groß]

@ Thorsten

Ja, aber ist Agar-Agar nicht sowas wie getrockente Algen? Oder lösen die sich auch in weniger warmen Wasser als Agar-Agar?

Mhh, aus dem Stehgreif würde ich sagen, müsste mit Antibiotika gehen. Aber was machst du mit den Pilzen?Dagegen hilft kein Antibiotika. Ich weiß auch net, ob sowas den Kulturen mehr schadet als nützt.

Aber ich bin kein Experte, ist nur eine Vermutung.

Ciao Oliver

[Gast sebi]

Hallo zusammen,

sind denn die Hormone im EVM und EBM Medium enthalten ??? ????.

Viele Grüsse

Sebi

[Oliver Groß]

@ sebi

ja, im EVM und EBM sind die Hormone schon drin.

EVM: Ist für die Vermehrung. Er enthält Cytokinine und Auxine

EBM: Ist für die Bewurzelung. Er enthält nur Auxine.

Die Frage, die sich zuerst bei mir dann stellte war, wie dann die Sprosse gebildet werden. Dafür wäre ja eigentlich ein Nährboden nur mit Cytokinine nötig. Lösung: Nach der Bewurzelung werden sich dann aus den Wurzelansätze die Sprossen bilden, sobald sie auf "hormonfreie" Nährböden kommt. Das wäre dann normales Substrat.  ??? Oder wie soll man sich das vorstellen?

Sonst müsste man halt noch einen Nährboden mit Cytokinine anlegen und nach der Vermehrung erst auf diesen weiter kultivieren und dann auf dem EBM. Oder ist es sinnvoller erst auf dem EBM die Wurzel bilden zu lassen und dann auf dem Nährboden mit Cytokinine weitermachen?

Ciao

Oliver

[Halil]

Ich verwende für Dionaea und Drosera Arten das MS (Murashige & Skoog) wobei der Stickstoff auf die Hälfte reduziert wird. Außerdem wird 2% Sucrose und 5,5g Agar Agar dazugegeben. Normalerweise braucht man keine Hormone im Medium, erst wenn sie keine Wurzeln bildet, sollte man auf ein neues MS Medium mit 0,1mg / Liter NAA (ein Auxin) umsetzen.

Wer MS-Medium braucht kann sich bei mir melden

halilergin@hotmail.com

Gruß Halil

[Gast sebi]

Hallo zusammen,

muss man den das EVM und EBM medium auch noch verdünnen? ???

Oder kann man das einfach so für in vitro nehmen?

Kenne leider die zusammensetzung der beiden Nährböden nicht. :'(

Viele grüsse Sebi

[Oliver Groß]

@ Halil

Aber brauchen die Zellen nicht Cytokinine und Auxine für die Vermehrung?

Wenn ich nur einen MS-Nährboden habe und darauf die Gewerbeteile aufbringe, mache ich ja nichts anderes, als wenn ich Blatt- oder Wurzelstecklinge mache. Und dann brauche ich mir ja nicht den Aufwand mit den Nährböden zu machen. Oder verstehe ich Dich jetzt falsch?

Ich weiß nämlich nicht, wo die Zellen sich ohne die entsprechende Hormone vermehren werden und ohne die jeweiligen Hormone sich dann Wurzel bzw. Sprossen bilden werden.

Wie meinst Du das mit dem Stickstoff auf 50 % reduzieren? Ich gehe davon aus, dass ich den Nährboden ja nicht selbst zusammen mische, sondern ich schon fertigen MS-Nährboden nehme.

Wo wir gerade beim MS-Medium sind: Was würdest Du denn für den MS-Nährboden verlangen? Also wieviel Euro für wieviel?

@ Sebi

Auf dem Link, den ich Dir hier im Posting verlinkt habe, steht doch, wieviel Prozent Du von dem MS-Nährboden brauchst. Meist sind es 20 %. Es wird hier immer zwischen Mikro- und Makronährstoffe und Vitamine unterschieden. Da im MS-Medium meist alle diese 3 Stoffgruppe enthalten sind, musst Du das MS-Medium auf diese Prozentzahl verdünnen. Probleme hast Du nur bei den "Rezepten", bei denen einer oder mehre Gruppe verschiede Prozentzahlen haben. Da es schwer ist, dann die einzelnen Bestandteile zu mischen, würde ich einfach das Medium auf die kleinste Prozentzahl des "Rezeptes" verdünnen und öfters umlegen.

Aber wie gesagt, ich habe das noch nie selbst versucht, ist jetzt alles ein Gedankengang von mir.

Ciao Oliver

[Halil]

ich hatte die angaben eigentlich für Samen gemacht,

also auf 50% (halber Stickdtoff) MS aussähn und dann nochmal umlegen wenn sich keine Wurzeln bilden.

Die Phytohormone kommen normalerweise nur bei Gewebe- und Organkulturen zum Einsatz um diverse Aktionen auszulösen (z.B. Kallusbildung, Wurzelbildung, Adventivknospenbildung, ...).

Generell kann man sagen, dass Auxine die Wurzelbildung anregen und Cytokinine das Austreiben von ruhenden Knospen fördern.

[Gast sebi]

@Oliver

Ich habe aber kein MS Medium ich habe das EVM umd EBM Medium und da ich die zusammensetzund aller drei Nährböden nicht kenne weiß ich auch nicht auf wieviel % ich verdünnen muss.

PS.Kennt vielleict jemand welcher Nährboden

gut für die Vermehrung für Nepenthes gut ist und auf wieviel % man diesen verdünnen muss  ;D ;D

Viele grüsse Sebi

[Oliver Groß]

@ Halil

Ok, bei Samen macht das Sinn.  ;)Ich bin von Gewerbekultur ausgegangen. Ich verbinde Invitro immer mit Gewerbekultur. Habe noch nicht den Sinn in Invitro bei Samen bzw Knollen (habe ich auch mal gesehen) gesehen. Wenn ich über Samen vermehre, tue ich das auf Substrat.

Also du verdünnst den ganzen Nährboden auf 50 %? Es hat sich erst so angehört, als wenn Du den Stickstoffanteil allein nur halbierst. :D

Wieviel MS Nährboden könntest Du mir denn abgeben und wieviel willst Du dafür haben? Das hast Du mir noch nicht gesagt.

@ Sebi

Hast Du denn von Hummel? Dieser entspricht, so wie ich die Frau von der Firma verstanden habe, dem MS in etwa. Also kannst Du diesen Nährboden wie MS benutzen bzw. verdünnen. Aber es ist halt kein MS Medium. Aber wie Halil verstanden habe, hat er MS Nährboden. Wenn er uns evtl. was abgeben kann, kannst DU genau das "Rezept" befolgen.  ;)

Ciao Oliver

[Gast sebi]

Hallo Oliver ,

also muss ich das EVM und EBM medium auch auf 20% verdünnen?Womit muss ich denn die Medien verdünnen

mit sterilem Wasser Oder womit.Entschuldigung wenn ich so viel frage aber ich habe wirklich null Ahnung von in vitro.

Mfg Sebi ;D

[Oliver Groß]

Hallo Sebi,

also zum ersten nervst Du nicht.

Genau mit dest. aqua. verdünnen. und dann noch mal steril machen. Weil das dest. Wasser nicht steril ist.

Hier noch mal ein Link über steriles Arbeiten:

http://www.orchideenvermehrung.at/cgi-local/framebreaker/reload.pl?nodien/in%20vitro/

Geht zwar hier über Orchideenvermehrung, aber die Technik kann man gut übertragen.  :) Musst dann nur auf Aussaat gehen und dann auf Asymbiotische Aussaat.

Praktische Erfahrungen wird es erst Anfang dieses Jahres von mir geben. Habe mich bisher nur mit der Therorie befasst.

Ciao Oliver

[Gast sebi]

Weisst du zufällig auch noch wie man am besten Nepenthes über in vitro vermehrt.Möchte nähmlich gerne meine

Lieblingsart N.Sibuyanensis vermehren ;D ;D ;) :)

Gruss Sebi

[Gast H. Wistuba (Account gelöscht)]

Hallo,

ohne SEHR GROSSE Erfahrung mit in vitro Technik sollte man die Finger von Nepenthes Vermehrung aus nicht steril aufgezogenen Pflanzen lassen, denn an dieser Aufgabe scheitern auch Spezialisten in den allermeisten Fällen, da in den Pflanzen praktisch immer Pilze und/oder Bakterien vorhanden sind, die auf zuckerhaltigen Nährböden ganz hervorragend wachsen. Es wäre schade um die Mutterpflanze.

Hermann Wistuba

[Halil]

ups sorry, habs versehen

also das MS kostet bei Duchefa 1,70/l aber da die Firma in Holland ist mußte ich hohe Portokosten und Bearbeitungsgebühr zahlen (30 Euro).

Ich hatte das damals mal ausgerechnet und bezahle sogesehen 4,70 für ein liter MS. (4,7 g.) aber da wir ja nur die hälfte oder 1/3 der empfohlenen mänge brauchen ist es eigentlich günstig.

Du kannst aber auch bei Sigma betsellen, da kostet es auch 4,70.

Ich kann nur 4 oder 5 liter abgeben, der Preis ist dieselbe also 4,70/l + Porto.

[Gast sebi]

Aber warum kann man denn dann Drosera,Dionaea besser durch in vitro Vermehren als Nepenthes,muss man bei Nepenthes etwas besonderes beachten? ???

PS. wenn ich einen Nährboden verdünne und dann wieder bei 121 Grad sterilliesiere sterbebn dann nicht die ganzen Vitamine ????