In Vitro Kultur -> Taugt diese Medium was ?

[Lukas H.]

Hey Leute,

 

Ich bin per Zufall auf einen Ebay Artikel gestossen für die In-Vitro Kultur von Droseras und Dionaeas.

 

http://www.ebay.ch/itm/Multiplication-Medium-for-Dionaea-Venus-Flytrap-with-Vitamines-Phytohormones-1L-/111393079473?pt=LH_DefaultDomain_77&hash=item19ef8b80b1

 

Da ich ein experimentierfreudiger Mensch bin und mich auch am einlesen bin bezuglich Tissue Culture (was gar nicht so leicht ist) wollte ich mal hier die Spezialisten fragen, was ihr von dem Artikel bzw. der Zusammensetzung haltet ?

 

Ist es geeignet für erste Versuche zu betreiben ?

 

und was benötige ich noch zu dieser Mischung neben destiliertem Wasser; Agar ? Auxine ? Cytokinine ?

 

einen Schnellkochtopf und autoklavierbare Gefässe habe ich schon und Alkohol und Bleiche sollten keine grosse Probleme darstellen

 

Zu meinem Vorhaben ich möchte Versuchen Droseras aus Samen zu ziehen, und eine Dionaea zu klonen.

 

Gruss Lukas

[Andreas Wistuba]

Hallo Lukas,

ich sehe nirgends Angaben zur Zusammensetzung???

Grüße

Andreas

[Andreas Wistuba]

P.S.

 

Was Dir fehlt ist eine Reinraumbank oder alternativ ein Handschuhkasten.

[Marc S.]

Hallo Lukas,

nebst den fehlenden Angaben zur Zusammensetzung (Micro- & Macroelemente), hat das Medium bereits Cytokinin in der Mischung und eignet sich daher nur für die Anregung von Seitentrieben, aber nicht für die Aussaat von Samen!

Falls du ein Medium ausprobieren möchtest, fange mit dem klassischen MS mit Vitaminen und der Aussaat von Samen an...

Lebendes Gewebe steril in vitro zu bringen ist nicht ganz einfach und erfordert viel Übung!

 

Ich empfehle dir, dich gründlich ins Thema einzulesen, denn die Anschaffung der nötigen Geräte und Substanzen geht schnell ins Geld!!! ;-)

 

 

Grüsse

Marc

[Lukas H.]

Ouuu die genaue Zusammensetzung steht da wirklich nicht dabei, dann muss ich mir das wohl nur eingebildet haben sorry!

 

@Andreas, die habe ich vergessen. Ich darf vielleicht das Labor eines Verwandten aus meinem Bekanntkreis benutzen.

 

@Marc, Alles klar das wusste ich nicht das sich Cytokinin nur für die Anregung von Seitentrieben eignet, verwendet man für Samen Gibberelline ?

 

Ich muss zugeben das es nicht so einfach ist in das Thema reinzukommen, ich finde bisher bezüglich der Sterilkultur von Karnivoren eigentlich sehr wenig, das meiste lese ich von Flytrapcare.com dort gibt es eine Anleitung und einen Forenbereich zur Tissue Culture.

 

Dann werde ich wohl mal mit einfachen Samen beginnen wenn die Profis mir das so empfehlen Nachdem ich mein Wissen noch weiter vertieft habe. Ich finde es ein echt spannendes Thema!

 

Ich dachte mir halt, dass dieses vorgefertigte Produkt noch lohnenswert für mich sein könnte, da es halt "funktioniert" und einen Praxisnähe bringt. Nach meiner Recherche ist es halt ja eher so das man seine Rezepte eher für sich behält und nicht gross im Internet verbreitet was aber auch verständlich ist!

 

Könnt ihr mir noch was empfehlen zum besser ins Thema reinzukommen? sozusagen "Anfänger-Lekture"

 

Gruss Lukas

 

werde mich morgen wieder melden, habe 2 Posts pro tag Limit

[Andreas Wistuba]

 

Falls du ein Medium ausprobieren möchtest, fange mit dem klassischen MS mit Vitaminen und der Aussaat von Samen an...

 

 

Hallo,

das angebotene Medium ist auch eine MS-Modifikation - soviel steht dabei.

Du solltest bei Karnivoren aber keinesfalls MS in voller Konzentration verwenden.

MS wurde für die Kultur von Tabak-Kallus entwickelt und Tabak ist ein Düngerfresser.

Viele Grüße

Andreas 

[Lukas H.]

Hallo,

das angebotene Medium ist auch eine MS-Modifikation - soviel steht dabei.

Du solltest bei Karnivoren aber keinesfalls MS in voller Konzentration verwenden.

MS wurde für die Kultur von Tabak-Kallus entwickelt und Tabak ist ein Düngerfresser.

Viele Grüße

Andreas 

 

Hallo,

Ich habe gelesen eine Konzentration von 1/3 bis 1/2  MS für Karnivoren.

 

habt ihr zufällig eine einfach Rezept für Drosera Samen zur erfolgreichen Keimung ? bin etwas unschlüssig bezüglich der Hormone.

 

zur Sterilisation der Samen habe ich für Drosera gefunden.

 

6 min in 10 % Bleiche mit ein paar Tropfen Tween

danach 3 min in sterilisertes, destiliertes Wasser

dann aufs Medium

 

der "quick-dip" in 70-90% Alkohol sollte nicht gemacht werden, um ein absterben der Samen zu verhindern, da diese schon echt winzig sind.

 

Gruss Lukas

[Marc S.]

Hallo Lukas,

fang doch erst mal simpel an: Samen sterilisieren und auf 1/5-1/3 MS aussähen. Steril arbeiten ist nicht so einfach, wenn man es noch nie gemacht hat... ;-)

 

Mit Hormonen rumspielen kannst du immernoch, wenn du etwas aus Samen in vitro hast! Die Sterilisationsprotokolle im Internet sind nicht schlecht - bei der Sterilisationszeit musst du selbst Erfahrungen sammlen (etwas zwischen 6-15 min. ist üblich bei 10% Bleiche). Zu kurz und du bekommst Kontaminationen und zu lange kann die Samen abtöten...

Ist aber alles von Same zu Same etwas unterschiedlich und auch, ob diese bereits sehr kontaminiert sind oder nicht...

 

Gruss

Marc

[Lukas H.]

Hallo Marc,

 

das mit dem steril arbeiten da bin ich mir auf jeden Fall sicher, dass das nicht ohne ist ;D

ich habe mir überlegt nach diesem Rezept zu arbeiten:

 

 

List of ingredients for preparing 1 liter of Dionaea muscipula (Venus fly trap) medium:

• 1/2 MS medium with vitamins (one half of a 1 liter packet or 2.2 grams). Most Tissue Culture Techs uses 1/3 MS for Carnivorous plants with great results.
• 2 tablespoons of table sugar (about 30g)
• 1 ml of BAP (1 mg/ml) – leave this out for seeds. It’s even optional for explants. Dionaea explants will form callus without it.
• 1 ml of PPM
• Agar
• Distilled water
• Vinegar and baking soda.

Steps to make media:

1. Fill a 1 quart or 1 liter container with 3 cups of water.
2. Add MS medium (1/2 packet or 2.2 grams) and 2 tablespoons of table sugar and mix well.
3. Measure 1 ml of BAP and 1ml of PPM and add them to the solution.
4. Add food coloring (if desired) to indicate BAP media.
5. Add enough water to bring the media mixture to exactly 1 liter
6. Test the pH. A pH between 5 and 6 is preferred with 5.6 to 5.8 being optimal.
   • If the pH is too low (“acidic”) add a VERY small amount of baking soda to the solution, remix it well and remeasure.
   • If the pH is too high (“basic”) add a few drops of vinegar to the solution, remix it well and remeasure.
   • Continue doing this until you reach the desired pH.
7. Once the desired pH is reached, start dispensing the media to the baby food jars. (NOTE: Some people add the agar first, but in my experience this causes some jars to be too soft while others are rock hard. I’ve found it better to add the agar after dispensing). You can put in 25ml or 50 ml into each jar.
8. Add the agar to the jars. For 25 ml of media, I use a “smidgen” spoonful and for 30ml to 50ml I use a “pinch” spoonful either level (for 30ml) or heaping (for 50ml). NOTE: You can also add the agar or other gelling agent (Gelcarin GP812, etc.) to the media before dispensing to the baby food jars. Agar isn’t soluble in water at room temperature so you’ll have to heat the media to near a boil to dissolve it. Gelcarin is soluble in water at room temperature, so you can add it before dispensing. For most applications I use between 6g and 8g of gelling agent per liter of media.
9. Cap the jars and place them in the pressure cooker, microwave or other autoclave device in preparation for sterilization.

 

Das habe ich von Flytrapcare.com gefunden, denke das passt jetzt für mich. Fürs erste lass ich aber das mit dem pH Wert anpassen da ich nicht im besitz bin eines Messgerätes und nicht gleich Geld investieren möchte und grossartig vertrauen ich China-Müll habe ich da auch nicht

 

Ich habe mir jetzt überlegt es auch mit PPM zu lösen, da ich halt keine Sicherheitswerkbank besitze sonder wahrscheinlich eher mir da was basteln werden aus halt ner Plastikbox und Plexiglas und auch keinen HEPA Filter kaufen möchte ( für den Anfang ) und probiers dann halt so, falls es da keine Einwende gibt

 

Das Einzige was ich jetzt noch echt toll wäre, wenn Ihr mir eure Bezugsquellen angeben könntet bzw. wo ichs am besten bestellen soll. Bin wie du Marc wohnhaft in der Schweiz, jedoch habe ich auch eine deutsche Lieferadresse zur Verfügung.

 

Gruss & schönes Wochenende

Lukas

[Andreas Wistuba]

Hallo Lukas,

statt Essigsäure und Natron würde ich KOH/NaOH bzw. H₂SO₄ verwenden.

Insbesondere bei Essig hätte ich Bauchweh...ist ziemlich phytotoxisch.

PPM, naja, das ist für Leute, die nicht steril arbeiten können - auch ziemlich phytotoxisch.

Steril arbeiten ohne sterilen Arbeitsplatz ist kaum möglich und PPM ist absolut kein Ersatz. Die meisten Kulturen wachsen mit dem "Wundermittel" nur noch rückwärts. Ich will Dich nicht entmutigen aber die Laminarbank ist das Herz eines Steril-Labors. Ohne eine solche kann man eigentlich nur Pilze und Bakterien ziehen. 

Grüße

Andreas

Bearbeitet 12. Juni 2015 von Andreas Wistuba

[Lukas H.]

Hallo Andreas,

Ouu alles klar naja schade das mit dem PPM. Hätte es einem viel einfacher gemacht aber naja ohne Fleiss kein Preis oder ?

Ich habe mir Gedanken gemacht und zwar spiele ich mit der Überlegung mir eine Glovebox zu basteln die so dicht wie möglich ist. Bin handwerklich begabt und einfallsreich und habe auch einen selbstgebauten 3D Drucker mit dem ich mir Notfalls auch Teile drucken könnte.

Ich habe mir überlegt alles in die Glovebox reinzutun, verschliessen und dann von innen aus mit Alkohol zu steriliseren, bevor ich beginne zu arbeiten.

Das ich mir aber noch Gedanken mache, ist das steriliseren meines Werkzeuges, diese werden ja sterilisert in 70% und dann kurz über eine Flamme gehalten, sodass keinerlei Alkohol mehr vorhanden ist. Jedoch habe ich da etwas bedenken, dass in einem Gefäß zu machen welches ich vorher mit Alkohol sterilisiert habe...

Jetzt meine Frage kann ich auch das Werkzeug mach dem Alkohol Bad kurz in ein Bad von sterilisertem, destilliertem Wasser halten ? sollte meiner Meinung auch klappen oder ?

Und hast du noch einen Insider Tipp vom Profi für den Bezug der Medien ?

Gruss und schönes Wochenende

Lukas

[Hermann Wistuba]

Hallo,

wenn Du das so machst, wie Du das beschreibst, ist nach dem ersten Mal Schluss, weil Dir die ganze Geschichte um die Ohren fliegt. Das Gemisch von Alkohldampf und Luft ist explosiv, d.h. durch die offene Flamme oder ein glühendes Werkzeug würdest Du alles zünden, und Du kämst mindestens mit schweren Verletzungen davon. Ich würde Dir empfehlen, Dich gründlich in die Materie einzulesen, bevor Du solche Experimente machst. Als ich vor mehr als 35 Jahren angefangen habe, habe ich mir aus PVC-Platten einen Hanschuhkasten geklebt, den ich über ein Sterilfilter mittels einer Aquarienpumpe mit Steril-Luft versorgt habe. da konnte ich mit einem kleinen Spiritusbrenner die Werkzeuge abflammen, das vorherige Tauchen in Spiritus ist nicht notwendig, eventuell sogar schädlich, da manche Bakterien das Bad im Spiritus überleben, und man so eine Infektion verschleppt. Das war übrigens der Anfang von der "Nepenthes-Nursery" vom Andreas.

Also nochmals der Rat: erst sich gründlich mittels Literatur (leider meist in Englisch) informieren

 

Gruß Hermann Wistuba

[Andreas Wistuba]

Hallo Lukas,

schon einige hier haben die LAF von "Lotte und Thomas" nachgebaut.

Die ist zwar sehr klein aber für Hobbyzwecke ausreichend:

 

http://www.orchideenvermehrung.at/deutsch.htm

 

Was die Medien angeht hast Du das Problem, dass die meisten größeren Anbieter nur an Gewerbetreibende liefern. Aber bei der Quelle, die Du oben genannt hast, gibt es ja Einiges.

Grüße

Andreas 

[Lukas H.]

Hallo Hermann & Andreas,

 

Ich bin mittlerweile gerade in der Beschaffung von den Materialien, die ich benötige. Manuel hat sich bei mir gemeldet und gibt Tipps und Tricks zur IV-Kultur und beantwortet mir meine viele Fragen. Ich bin nun sehr zuversichtlich, dass das klappt vielleicht nicht beim ersten Mal aber früher oder später wird das bestimmt . Ich möchte mich hier noch mal bedanken für die Hilfe und ein besonderes Dankeschön an meinen "Coach" Manuel

 

Gruss Lukas

[Lukas H.]

Hallo zusammen,

 

Mittlerweile ist es schon über ein Jahr her und es hat sich viel bei mir getan. Ich habe mich viel damit beschäftigt und konnte schon einige für mich grosse Fortschritte feststellen die ich euch allen nicht vorhalten möchte. Anbei ein paar Bilder. Mittlerweile habe ich meinen Nachbau LFH nach der Anleitung von Lotte und Thomas und bin sehr zufrieden damit.

 

Hier ein paar Impressionen.

 

Cephalotus Follicularis welcher sich gut entwickelt. Ich habe diesen aus Samen gezogen und hatte ihn schon auf Multiplikationsmedium.

 

Nepenthes Ampullaria. Wächst IV bei mir sehr gut. werde diese bald wieder auf frisches Nährmedium setzen.

 

Drosera Tokaiensis mit extremer Eigenmultiplikation. Ich hatte diese noch nie auf Multiplikationsmedium.

 

Drosera Spatulata var. Lovellae. ähnlich wie die Tokaiensis wachsen diese auch sehr schön.

 

Ein Becher der Drosera Tokaiensis welcher komplett akklimatisiert bei mir im Gewächsaus steht.

 

Ebenfalls diese Drosera Capensis 'wide leaf' verträgt die hohen Temperaturen problemlos und bildet sehr schöne Fallen aus.

 

Grüsse

Lukas

Bearbeitet 16. August 2016 von Savior777
richtigstellung Drosera Bezeichnungen

[Ril]

Hoi Lukas

 

Toll sieht das aus!  

Gibst du einige Pflanzen irgendwann auch ab, oder behälst du sie alle selber? Wenn ja, darf ich mich dann mal bei dir melden?

Bearbeitet 16. August 2016 von Ril

[Lukas H.]

vor 2 Stunden schrieb Ril:

Hoi Lukas

 

Toll sieht das aus!  

Gibst du einige Pflanzen irgendwann auch ab, oder behälst du sie alle selber? Wenn ja, darf ich mich dann mal bei dir melden?

 

Hoi Ril,

 

Ich danke dir!

Natürlich gebe ich auch welche ab. Ich bin momentan am akklimatisieren einiger Kulturen, da ich eigentlich nur komplett abgehärtete Pflanzen abgeben möchte. Ich habe mir eigentlich dafür September/ Oktober vorgenommen Pflanzen anzubieten bei etwas milderen Temperaturen als momentan.

 

Ich schreib dir ne PN bezüglich der Pflanzen ;-)

 

Gruss Lukas

[Gast]

Klasse Lukas, sieht toll aus.

 

Zwei kleine Korrekturen seien mir erlaubt, es heißt Drosera spatulata var. lovellae sowie Drosera tokaiensis

 

Grüße

Wolfgang

[Lukas H.]

vor einer Stunde schrieb Wolfgang Liere:

Klasse Lukas, sieht toll aus.

 

Zwei kleine Korrekturen seien mir erlaubt, es heißt Drosera spatulata var. lovellae sowie Drosera tokaiensis

 

Grüße

Wolfgang

 

Hallo Wolfgang,

 

Ich danke dir für dein positives Feedback. Habe die Bezeichnungen richtig gestellt. Der Beitrag wurde von mir während meiner Mittagspause verfasst und wie man sieht hab ichs bei den Drosera nicht so mit den Namen ;-)

 

Habe gerade noch die Kulturbecher gegenprüft. Glücklicherweise stimmt dort die Bezeichnung. Hatte wohl eine kleine Eigeninterpretation im Gedächnis :-P

 

Gruss Lukas

[Lukas H.]

Hallo zusammen,

 

Ich habe wieder ein paar spannende Bilder meiner Kulturen die ich euch nicht vorenthalten möchte :-)

 

Nepenthes Inermis legt gut an Wachstum zu ich denke beim nächsten umsetzten werde ich Sie auf Multiplikationsmedium setzen.

 

Nepenthes Glabrata, eine von mir frisch zugekaufte Kultur. Sieht momentan noch etwas mitgenommen vom Transport aus aber ich denke Sie wird sich schnell wieder fangen :-)

 

Drosera Capensis 'wide leaf', einer meiner Kalli welche nun viele Sprösslinge bildet. Dies ist einer meiner selektierten Klone die mir durch ihren schön breiten Blattwuchs besonders gefiel.

 

Cephalotus Follicularis, einer meiner vielen Kulturbecher die sich prächtig entwickelt haben.

 

Nepenthes Ampullaria 'red' momentan auf Multiplikationsmedium. Gefällt mir gut wie sich diese entwickeln :-)

 

Drosera Madagascariensis, aus diesen Kalli wachsen viele Sprösslinge. Den "Baumstamm" finde ich besonders witzig.

 

Drosera Spatulata var. Lovellae wuchert nach wie vor unglaublich vor sich hin :-) habe schon zwei Becher abgehärtet und immernoch mehr als genug in Kultur.

 

Nepenthes Ampullaria 'red' mein grösstes Expemplar. War noch nie auf Hormonmedium. Ich werde diese bald beginnen abzuhärten bin gespannt wie sich diese entwickeln werden. Leider fehlt mir momentan noch an Platz um diese dann auch zu kultivieren.

 

Falls jemand noch vor dem Winter was an IV Kulturen tauschen möchte, kann dieser sich gerne bei mir per PM melden :-) (@Admin: falls dies hier nicht erlaubt ist, bitte bei mir melden. Ich werde es dann natürlich entfernen ;-)).

 

Ich freue mich auf eure Antworten.

 

Gruss Lukas :-)

[ChristophBurdeska]

Leider funktioniert der Link zur LAF anleitung nicht mehr und ich bin zu dumm den zu finden. Kann mir jemand helfen, mich würde der interessieren.

[Lukas H.]

vor 27 Minuten schrieb ChristophBurdeska:

Leider funktioniert der Link zur LAF anleitung nicht mehr und ich bin zu dumm den zu finden. Kann mir jemand helfen, mich würde der interessieren.

 

Versuchs mit dem ;-)

http://www.orchideenvermehrung.at/lfh/index.htm

 

Gruss Lukas

[ChristophBurdeska]

Klasse, danke!